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流式細(xì)胞術(shù)在科研方面有哪些應(yīng)用?

 更新時間:2024-04-08 點(diǎn)擊量:834

流式細(xì)胞術(shù)(FCM)是一種對處在快速流動中的細(xì)胞或其它生物微粒逐個進(jìn)行多參數(shù)的快速定量分析和分選的技術(shù)。它集計算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、熒光標(biāo)記技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、細(xì)胞免疫學(xué)于一體,按照細(xì)胞或生物顆粒的物理或化學(xué)性質(zhì),同時具有分析和分選細(xì)胞或生物顆粒的功能。

流式細(xì)胞術(shù)在科研方面有哪些應(yīng)用?讓我們一起來看看吧!

一、細(xì)胞凋亡檢測

在正常細(xì)胞中,細(xì)胞膜上的磷脂酰絲氨酸(PS)位于胞漿側(cè)。細(xì)胞凋亡中期,PS 外翻。Annexin V 是一種 Ca2+ 依賴的對 PS 具有高度親和力的磷脂結(jié)合蛋白,因此可以用熒光標(biāo)記的 Annexin V 檢測 PS 的外翻。凋亡末期,細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)受損,原本不透膜的核酸染料(如 PI、7-AAD 等)也能進(jìn)入細(xì)胞,從而產(chǎn)生信號。分別檢測 Annexin V 和不透膜核酸染料的信號,可對凋亡中期和末期細(xì)胞的比例進(jìn)行定量。

二、細(xì)胞周期檢測

細(xì)胞核 DNA 含量隨著細(xì)胞增殖周期時相的不同而發(fā)生變化,用 DNA 染料進(jìn)行染色,DNA 含量多,熒光信號強(qiáng),DNA 含量少,熒光強(qiáng)度低。通過對細(xì)胞瞬間的快速測定,判斷細(xì)胞所處的細(xì)胞周期時相,并分析群體細(xì)胞中處于不同周期時相的細(xì)胞比例,以研究細(xì)胞的周期,DNA 復(fù)制和染色體倍性等。在腫瘤學(xué)研究中尤其常用,可以此來判斷藥物對腫瘤細(xì)胞影響、腫瘤的生長速度與患者預(yù)后等。

三、Th/Treg檢測

通過刺激阻斷劑對 T 細(xì)胞進(jìn)行處理,通過檢測表面或胞內(nèi)標(biāo)志物進(jìn)行分型檢測。

四、免疫分型檢測

利用細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)特異性抗體分子,分別選用不同標(biāo)記的流式抗體對細(xì)胞進(jìn)行分型和分析。


利用抗原/抗體反應(yīng)原理,采用不同的流式抗體對樣本進(jìn)行檢測可達(dá)到對不同細(xì)胞進(jìn)行分型檢測的目的。
五、細(xì)胞因子檢測
采用 CBA 或液相芯片的方法將捕獲抗體和微球/液相芯片結(jié)合,檢測抗體和 SA-PE 結(jié)合通過抗原抗體特異性反應(yīng)達(dá)到多種細(xì)胞因子檢測的目的。
六、細(xì)胞分選
細(xì)胞分選利用流式細(xì)胞分選儀來分離純化細(xì)胞或顆粒以供進(jìn)一步分析。
七、其他
其他還包括死/活細(xì)胞檢測、線粒體檢測、外泌體檢測。
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